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细胞浸润及迁移动力学检测

        肿瘤细胞浸润及迁移活性决定肿瘤发生发展及肿瘤的恶性程度。对其机理的研究,有助于对恶性肿瘤的发病机理以及抗肿瘤药物的研究。目前常用的细胞浸润及迁移分析方法有微孔滤膜(Boyden 小室)法,伤口愈合试验法等,其基本特征为终点测定,细胞需标记,不但操作复杂而且误差较大。

        杭州高通量新药筛选中心采用电子阻抗原理检测细胞的技术,使用xCELLigence 实时细胞分析DP(RTCA-DP)系统及技术改良的Boyden细胞迁移检测16x CIM-Plate,将微电子传感器附着在细胞迁移面,为此,迁移的细胞会被传感器所识别并实时记录。该方法无需标记并可连续动态观察肿瘤细胞在趋化因子的作用下的浸润及迁移动力学。同时可观察各种药物及生物因子对肿瘤浸润及迁移活性的影响。该方法为全自动化定量数据采集,因此所提供的数据比常规的终点染色方法更客观,准确。 该方法除可对肿瘤细胞浸润及迁移检测外,还可对血管内皮细胞迁移进行动态观察,提供各种趋化因子及药物对血管增生作用的。 

使用RTCA系统检测细胞浸润及迁移的优点
• 细胞无需标记 
• 实验全程实时全自动化定量检测, 提供细胞浸润及迁移动力学数据
• 评估多种肿瘤细胞在趋化因子的作用下的浸润及迁移响应
• 评估化合物及生物因子对肿瘤浸润及迁移的影响的量效及时效关系, 计算实时IC50/EC50数值
• 评估化合物及趋化因子对血管内皮细胞迁移的影响的量效及时效关系, 计算实时IC50/EC50数值

实例
 

图A, 为不同数量HELA细胞的迁移动力学曲线。非标记活细胞检测技术提供细胞数及时间相关的肿瘤细胞迁移动力学数据。

图B, 为不同数量的HT1080细胞的浸润动力学曲线,与单纯的细胞迁移实验不同,细胞浸润实验是检测细胞破坏细胞外基质蛋白(胶原蛋白,Matrigel)的能力,因此,在实验时,外加了一层细胞外基质蛋白(Matrigel BD)从图中可以看出,和细胞迁移动力学曲线相比,除了被检测信号低于迁移动力学曲线之外,细胞浸润动力学曲线有一明显的6小时滞后期(又称浸润期), 对浸润期的研究,有助于认识肿瘤细胞浸润活性,同时有助于抗肿瘤药物的开发。

 应用范围
• 抗肿瘤药物研发
• 血管增生机理研究
• 抗血管增生药物研发

可提供的用于检测细胞迁移和浸润的细胞株

细胞株 肿瘤类型 应用
A549 人非小细胞肺癌 抗肿瘤药物研发
H460 人非小细胞肺癌 抗肿瘤药物研发
HT1080 人纤维肉瘤 抗肿瘤药物研发
SKOV3 人卵巢癌 抗肿瘤药物研发
HS578 人卵巢癌 抗肿瘤药物研发
MDA-MB231 人乳腺癌 抗肿瘤药物研发
HELA 人宫颈癌 抗肿瘤药物研发
MCF7 人乳腺癌 抗肿瘤药物研发
NIH 3T3 小鼠成纤维细胞 抗肿瘤药物研发
HUVEC 人脐静脉内皮细胞 血管增生机理研究, 抗血管增生药物研发

实验参数

细胞株 提供10种以上不同来源的肿瘤细胞
药物浓度梯度 5-8
加药的重复孔数 2-4
阳性对照(孔的数量) 2
阴性对照(孔的数量) 2
实验温度 生理温度,37度
实验的时间设置 48 小时以上
化合物及生物因子对肿瘤细胞迁移的IC50/EC50值 至少两个时间点(如6、12 小时)
化合物对细胞生长因子(VEGF,HGF)介导的HUVEC细胞迁移的IC50值 至少两个时间点(如6、12 小时)
实验步骤和报告
提供电子报告(PDF格式)


参考文献
• Ke Y, Wu D, Princen F, Nguyen T, Pang Y, Lesperance J, Muller WJ, Oshima RG, Feng GS. Role of Gab2 in mammary tumorigenesis and metastasis. Oncogene. 2007; 26: 4951–4960.
Bird, C., Kirstein, S. Real-time, label-free monitoring of cellular invasion and migration with the xCELLigence system (Application Notes) Nature Methods, 6 (2009).
Friedl P, Wolf K.Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.Nat Rev Cancer. 2003 May;3(5):362-74